PRAKTIKUM 6 PENGECATAN BAKTERI

PENGECATAN BAKTERI

A.    Tujuan

Dapat melakukan pengecatan sederhana dan pengecatan gram serta menggolongkannya berdasarkan hasil pengamatan

B.    Alat dan Bahan

1.      Ose steril

2.      Object glass dan penutup

3.      Bunsen

4.      Mikroskop

5.      Formalin 1%

6.      Cat gram A, B, C dan D

7.      Kultur bakteri dari praktikum 5

C.    Cara Kerja
      Pengecatan Gram

a.    Bersihkan gelas benda dengan alkohol hingga bebas lemak

b.    Buatlah olesan bakteri pada gelas benda tersebut

c.    Kering anginkan dan kemudian fiksasi dengan pemanasan

d.   Bubuhi secara merata olesan tersebut dengan kristal violet (Gram A) dan biarkan selama 30 detik, kemudian cuci sampai bersih dengan air mengalir

e.    Bubuhi merata dengan larutan iodine (Gram B, larutan mordan), biarkan selama satu menit, kemudian cuci dengan air mengalir

f.     Tuangi dengan etil alkohol 93% (Gram C) selama 15 - 25 detik untuk dekolorisasi (penghilangan cat). Dekolorisasi telah terjadi dan berakhir ketika aliran solvent (etil alkohol) menjadi tidak berwarna lagi. Selanjutnya cuci bersih dengan air mengalir

g.    Bubuhi dengan safranin (Gram D) selama 45 detik.

h.    Cuci dengan air mengalir dan kering anginkan atau keringkan dengan kertas penghisap

i.      Pengamatan dengan mikroskop cahaya

E.     Pertanyaan diskusi

1.      Mengapa pada bakteri harus dilakukan pewarnaan gram sebelum dilihat di
bawah mikroskop?

2.      Sebutkan fungsi pewarnaan kristal violet dan safranin pada pewarnaan gram!

3.      Mengapa bakteri gram (+) berwarna biru ungu sedangkan bakteri gram (-) berwarna merah muda ketika dilakukan pengecatan gram?

4.      Jelaskan prosedur pewarnaan sederhana

5.      Sebutkan tujuan pengecatan pada bakteri!